三维试验是一种检测β-内酰胺酶(ESBL)的方法，在传统的纸片扩散法基础上发展而来。纸片扩散法药敏试验，将细菌接种在琼脂平板表面，贴上药物纸片。纸片上的药物向周围的培养基中扩散，构成一维。琼脂平板表面的细菌生长，产生了抗药性酶，向培养基中扩散，构成另一维。所以，纸片扩散法是二维试验。三维试验，在纸片旁边的琼脂刻一深纹，其中加入受试菌液。细菌生长后，产生的抗药性酶向四周的琼脂中扩散，构成第三维。检测ESBL，接种细菌后，贴上第三代头孢菌素纸片，在纸片边上的深纹中加被测菌液。纹中的细菌生长时产生ESBL，扩散到周围的培养基中。扩散到培养基中的抗生素，遇到ESBL后被水解，不能对细菌生长产生抑制效应，形成的只能是变形的抑菌环。细菌不产生ESBL，抑菌环规则。目前，三维试验是检测ESBL的标准方法。